SARS-CoV-2 感染引起的冠状病毒病 (COVID-19) 对全球公共卫生构成了严重威胁。为了开发特定的抗冠状病毒治疗剂和预防剂，必须首先确定病毒感染的分子机制。因此，我们在此建立了一种 SARS-CoV-2 刺突 (S) 蛋白介导的细胞-细胞融合试验，发现与 SARS-CoV 相比，SARS-CoV-2 显示出更高的质膜融合能力。我们解析了 SARS-CoV-2 S 蛋白 S2 亚基中 HR1 和 HR2 域的六螺旋束 (6-HB) 核心的 X 射线晶体结构，揭示了 HR1 域中的几个突变氨基酸残基可能是与增强与 HR2 域的交互相关。我们之前开发了一种泛冠状病毒融合抑制剂 EK1，它针对 HR1 结构域，可以抑制包括 SARS-CoV 和 MERS-CoV的不同人类冠状病毒的感染。本研究，我们合成了一系列源自 EK1 的脂肽，发现 EK1C4 是针对 SARS-CoV-2 S 蛋白介导的膜融合和假病毒感染最有效的融合抑制剂，IC50 分别为 1.3 和 15.8 nM，约 241 和 149 倍分别比原始的 EK1 肽更有效。EK1C4 对膜融合和其他测试过的人类冠状病毒假病毒（包括 SARS-CoV 和 MERS-CoV 以及 SARSr-CoV）的感染也非常有效，并有效抑制了 5 种已检查的活人类冠状病毒的复制. 并且在用 HCoV-OC43 攻击之前或之后鼻内应用EK1C4 可保护小鼠免受感染。